1⃣　ボロン酸を冷凍庫から出して常温にて融解してください。

2⃣　滅菌水あるいは滅菌生理食塩水に純培養したコロニーを懸濁し、McFarland0.5の菌液を調製します。

3⃣　調製した菌液を、ミューラーヒントン(MH)寒天平板培地に綿棒で均一に塗抹します。120度ずつ角度を変えて塗抹することを3～4回　　　行います。(参考:M02Ed13Eでは、培地全面に塗布したのち、60度ずつ角度を変え、さらに2回同様に塗布する旨の記載があります。)

4⃣　同じ薬剤のディスクを2枚3cm離して培地上に置き、2枚の一方に本品(ボロン酸)を10µL添加します。

5⃣　35℃で一晩(16から18時間)培養後、ボロン酸の添加により阻止円径の拡張(原則5mm以上)を認めた場合、陽性と判断します。

測定に使用する薬剤は、以下の文献を参考に選択してください。

・国立感染症研究所 2020 病原体検出マニュアル 薬剤耐性菌Ver2.0

・Yagi et al. Practical Methods Using Boronic Acid Compounds for Identification of Class Cb-Lactamase-Producing Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli. 2005 J. Clin. Microbiol. 43:2551-2558